肝素瓊脂糖凝膠穩定性好,基團脫落少,使用壽命長,使用方便,應用廣泛??捎糜诳鼓蜃英?、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干擾素、核酸結合蛋白、限制內切酶、凝血酶及類凝血酶等生物大分子的分離純化。肝素能和凝血因子和其他血漿蛋白,脂蛋白,蛋白質合成因子,作用于核酸和類固醇受體的酶,所以凝膠可以用于這類物質的純化。
肝素瓊脂糖凝膠應用規范:
1)該凝膠從冷室或冰箱中取出后在室溫下緩慢振搖恢復到室溫,然后再裝柱,以免產生氣泡影響柱效;
2)吸附:20-50mM,pH7.4-8.0的緩沖液,為避免離子交換的干擾,緩沖液中可以適當加50mM-100mM的NaCl,,zui常用的為Tris-HCl緩沖液;
3)洗脫:可以用pH7.4-8.0的緩沖液加0.2-2M進行階段或者線性洗脫;
4)上樣樣品必須與平衡柱子的緩沖液的pH、電導相同;
5)不同的樣品,吸附和洗脫方法不相同,可以根據相關的文獻進行;
6)凝膠親和填料的再生處理方法:先用0.1M Tris-HClpH7.0緩沖液洗3個柱床體積,然后用0.1M NaOH含2MNaCl流洗3個床體積,后用20%乙醇洗 3個床體積即可。長時間用酸堿洗填料會是填料的吸附能力下降,所以清洗要盡量縮短時間;
7)該親和填料保存條件為20%乙醇,4-8℃。
